双&苍产蝉辫;氰&苍产蝉辫;胺（ｄｉｃｙａｎｄｉａｍｉｄｅ，ＤＣＤ）又&苍产蝉辫;称&苍产蝉辫;二&苍产蝉辫;氰&苍产蝉辫;二&苍产蝉辫;胺，分子式&苍产蝉辫;为Ｃ２Ｎ４Ｈ４。双&苍产蝉辫;氰&苍产蝉辫;胺&苍产蝉辫;是&苍产蝉辫;一&苍产蝉辫;种&苍产蝉辫;白色&苍产蝉辫;结&苍产蝉辫;晶&苍产蝉辫;粉&苍产蝉辫;末，可溶于水，是一种重要的有机化工原料，可用于生产叁&苍产蝉辫;聚&苍产蝉辫;氰&苍产蝉辫;胺，在&苍产蝉辫;医&苍产蝉辫;药&苍产蝉辫;工&苍产蝉辫;业&苍产蝉辫;中&苍产蝉辫;也&苍产蝉辫;可&苍产蝉辫;以&苍产蝉辫;用&苍产蝉辫;于&苍产蝉辫;制&苍产蝉辫;取硝&苍产蝉辫;酸&苍产蝉辫;胍和&苍产蝉辫;磺&苍产蝉辫;胺&苍产蝉辫;类&苍产蝉辫;药&苍产蝉辫;物，还&苍产蝉辫;可&苍产蝉辫;以&苍产蝉辫;用&苍产蝉辫;于&苍产蝉辫;固&苍产蝉辫;色&苍产蝉辫;剂、黏&苍产蝉辫;合&苍产蝉辫;剂&苍产蝉辫;等，农业上用于对肥料的凝固作用，防止肥料流失，对肥料中的硝酸盐类（如硝酸钾）、胺类化合物进行中和，减少该类化学物质的有害作用。双氰胺对人&苍产蝉辫;体&苍产蝉辫;是否有害以及含量多少会对人体产生危害目前尚没有明确的研究结&苍产蝉辫;论，还需要进行毒理研究。但&苍产蝉辫;双&苍产蝉辫;氰&苍产蝉辫;胺是含氮量高且性&苍产蝉辫;质&苍产蝉辫;较&苍产蝉辫;稳&苍产蝉辫;定&苍产蝉辫;的&苍产蝉辫;非&苍产蝉辫;蛋&苍产蝉辫;白&苍产蝉辫;氮&苍产蝉辫;物质，少&苍产蝉辫;量&苍产蝉辫;加入不影响食品风&苍产蝉辫;味；由&苍产蝉辫;于&苍产蝉辫;目&苍产蝉辫;前&苍产蝉辫;国&苍产蝉辫;家&苍产蝉辫;标&苍产蝉辫;准&苍产蝉辫;规&苍产蝉辫;定&苍产蝉辫;的&苍产蝉辫;蛋&苍产蝉辫;白质测定方法基于&苍产蝉辫;凯&苍产蝉辫;氏&苍产蝉辫;定&苍产蝉辫;氮&苍产蝉辫;法，样品中任何含氮物质均折算成蛋白质含量，因此很可能被不法商家利用，非法添加到食品中。
本文建立了乳制品中双氰胺的液相色谱－紫外检测法，优化&苍产蝉辫;了&苍产蝉辫;前&苍产蝉辫;处&苍产蝉辫;理&苍产蝉辫;方&苍产蝉辫;法&苍产蝉辫;和&苍产蝉辫;高&苍产蝉辫;效液&苍产蝉辫;相&苍产蝉辫;色&苍产蝉辫;谱&苍产蝉辫;条&苍产蝉辫;件。该&苍产蝉辫;方法&苍产蝉辫;简&苍产蝉辫;便、快&苍产蝉辫;速、有&苍产蝉辫;效，适&苍产蝉辫;用&苍产蝉辫;于&苍产蝉辫;乳制品中双氰胺的检测。
一、实验部分
１．１仪器、设备和试剂
Ａｇｉｌｅｎｔ１２６０高&苍产蝉辫;效&苍产蝉辫;液&苍产蝉辫;相&苍产蝉辫;色&苍产蝉辫;谱&苍产蝉辫;仪（配&苍产蝉辫;二&苍产蝉辫;极&苍产蝉辫;管&苍产蝉辫;阵&苍产蝉辫;列检测器）；乙&苍产蝉辫;腈、甲&苍产蝉辫;酸（色&苍产蝉辫;谱&苍产蝉辫;纯，Ｍｅｒｃｋ公司）；试&苍产蝉辫;验&苍产蝉辫;用水为Ｍｉｌｌｉ－Ｑ超&苍产蝉辫;纯&苍产蝉辫;水。标&苍产蝉辫;准&苍产蝉辫;物&苍产蝉辫;质：双&苍产蝉辫;氰&苍产蝉辫;胺（纯&苍产蝉辫;度９９．４％，Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ公司）。
双&苍产蝉辫;氰&苍产蝉辫;胺&苍产蝉辫;标&苍产蝉辫;准&苍产蝉辫;溶&苍产蝉辫;液&苍产蝉辫;的&苍产蝉辫;配&苍产蝉辫;制：准&苍产蝉辫;确&苍产蝉辫;称&苍产蝉辫;取１００ｍｇ双氰胺标准品于１００ｍＬ容量&苍产蝉辫;瓶&苍产蝉辫;中，用&苍产蝉辫;水&苍产蝉辫;溶&苍产蝉辫;解，配&苍产蝉辫;制&苍产蝉辫;成１．０ｇ／Ｌ的储备液。用流动相&苍产蝉辫;将&苍产蝉辫;标&苍产蝉辫;准&苍产蝉辫;储&苍产蝉辫;备&苍产蝉辫;液&苍产蝉辫;稀&苍产蝉辫;释&苍产蝉辫;成０．５、１．０、２．０、５．０、１０．０、２０．０、５０．０ｍｇ／Ｌ的系列标准溶液。
１．２色谱条件
液相色谱&苍产蝉辫;柱：ＸＢｒｉｄｇｅＡｍｉｄｅ柱（２５０ｍｍ&迟颈尘别蝉;４．６ｍｍ，３．５&尘耻;ｍ，Ｗａｔｅｒｓ公&苍产蝉辫;司）；柱&苍产蝉辫;温：３５&诲别驳;颁；进&苍产蝉辫;样&苍产蝉辫;量：２０&尘耻;Ｌ；流动相：乙&苍产蝉辫;腈－水（体&苍产蝉辫;积&苍产蝉辫;比&苍产蝉辫;为９０∶１０）（含&苍产蝉辫;体&苍产蝉辫;积分数为０．２％的&苍产蝉辫;甲&苍产蝉辫;酸）；流&苍产蝉辫;速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；检&苍产蝉辫;测&苍产蝉辫;波长：２１８ｎｍ。
１．３样品前处理
称取固态、半固态样品（奶粉、炼&苍产蝉辫;乳&苍产蝉辫;等）１ｇ（精&苍产蝉辫;确到０．０１ｇ）或&苍产蝉辫;液&苍产蝉辫;态&苍产蝉辫;样&苍产蝉辫;品（纯&苍产蝉辫;奶、酸&苍产蝉辫;奶&苍产蝉辫;等）２ｇ（精&苍产蝉辫;确到０．０１ｇ），置于１０．０ｍＬ比色管中，固态、半固态样品加入３ｍＬ７０&诲别驳;颁热水，液态样品加&苍产蝉辫;入１ｍＬ７０&诲别驳;颁热水&苍产蝉辫;充分涡旋２ｍｉｎ，置于７０&诲别驳;颁热水浴中１５ｍｉｎ充分溶解提取，冷却至&苍产蝉辫;室&苍产蝉辫;温，涡&苍产蝉辫;旋&苍产蝉辫;中&苍产蝉辫;分３次&苍产蝉辫;加&苍产蝉辫;入&苍产蝉辫;乙&苍产蝉辫;腈，每次加入２ｍＬ，锄耻颈后用乙腈定容至１０．０ｍＬ，涡&苍产蝉辫;旋&苍产蝉辫;摇匀，取２ｍＬ液体至２ｍＬ离&苍产蝉辫;心&苍产蝉辫;管&苍产蝉辫;中，以８０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取１．０ｍＬ上&苍产蝉辫;清&苍产蝉辫;液&苍产蝉辫;于５０&诲别驳;颁下&苍产蝉辫;氮&苍产蝉辫;气&苍产蝉辫;吹干，用１．０ｍＬ流&苍产蝉辫;动&苍产蝉辫;相&苍产蝉辫;溶&苍产蝉辫;解，过０．４５&尘耻;ｍ滤&苍产蝉辫;膜，滤&苍产蝉辫;液供ＨＰＬＣ分析。
二、结果与讨论
２．１色谱条件的优化对双氰&苍产蝉辫;胺&苍产蝉辫;标&苍产蝉辫;准&苍产蝉辫;溶&苍产蝉辫;液&苍产蝉辫;进&苍产蝉辫;行&苍产蝉辫;光&苍产蝉辫;谱&苍产蝉辫;扫&苍产蝉辫;描，发&苍产蝉辫;现&苍产蝉辫;在２１８ｎｍ处有锄耻颈大吸收，确定其检测波长为２１８ｎｍ。
双&苍产蝉辫;氰&苍产蝉辫;胺&苍产蝉辫;在Ｃ１８柱&苍产蝉辫;上&苍产蝉辫;几&苍产蝉辫;乎&苍产蝉辫;无&苍产蝉辫;保&苍产蝉辫;留。双&苍产蝉辫;氰&苍产蝉辫;胺&苍产蝉辫;的&苍产蝉辫;性质和叁聚氰胺类&苍产蝉辫;似，因&苍产蝉辫;此&苍产蝉辫;试&苍产蝉辫;图&苍产蝉辫;采&苍产蝉辫;用&苍产蝉辫;与&苍产蝉辫;叁&苍产蝉辫;聚&苍产蝉辫;氰&苍产蝉辫;胺&苍产蝉辫;检测相同的多种离子对试剂如庚烷磺酸钠等作为流动相，但是没有达&苍产蝉辫;到&苍产蝉辫;预&苍产蝉辫;期&苍产蝉辫;效&苍产蝉辫;果。基于双氰胺的性质，采&苍产蝉辫;用&苍产蝉辫;了ＸＢｒｉｄｇｅＡｍｉｄｅ柱&苍产蝉辫;作&苍产蝉辫;为&苍产蝉辫;分&苍产蝉辫;离&苍产蝉辫;柱。选&苍产蝉辫;择&苍产蝉辫;不同比例的乙腈－水作为流动相，对&苍产蝉辫;双&苍产蝉辫;氰&苍产蝉辫;胺&苍产蝉辫;标&苍产蝉辫;准&苍产蝉辫;溶&苍产蝉辫;液&苍产蝉辫;进行测定，没有出现目标物色谱峰，加入少量甲酸后，得到相应的目标物色谱峰。通过实验锄耻颈终确定以含０．２％甲酸的乙腈－水（９０／１０，ｖ／ｖ）作&苍产蝉辫;为&苍产蝉辫;流&苍产蝉辫;动&苍产蝉辫;相&苍产蝉辫;时，目标峰的峰形和保&苍产蝉辫;留&苍产蝉辫;时&苍产蝉辫;间&苍产蝉辫;锄耻颈&苍产蝉辫;佳，并且目标峰的保留时间为５ｍｉｎ左&苍产蝉辫;右，大大减少了基质对目标峰的干扰作用，优化条件下的标准溶液色谱图见图１。
２．２前处理方法的建立
乳制品基质&苍产蝉辫;比&苍产蝉辫;较&苍产蝉辫;复&苍产蝉辫;杂，对检测的主要干扰物为脂肪和蛋白质，因&苍产蝉辫;此&苍产蝉辫;除&苍产蝉辫;去&苍产蝉辫;脂&苍产蝉辫;肪&苍产蝉辫;和&苍产蝉辫;蛋&苍产蝉辫;白&苍产蝉辫;质&苍产蝉辫;的&苍产蝉辫;干&苍产蝉辫;扰&苍产蝉辫;锄耻颈&苍产蝉辫;为关键。综合考虑&苍产蝉辫;采&苍产蝉辫;用&苍产蝉辫;有&苍产蝉辫;机&苍产蝉辫;试&苍产蝉辫;剂&苍产蝉辫;沉&苍产蝉辫;淀&苍产蝉辫;蛋&苍产蝉辫;白&苍产蝉辫;质，便&苍产蝉辫;于&苍产蝉辫;后续样品的处理。
直接用乙腈&苍产蝉辫;进&苍产蝉辫;行&苍产蝉辫;定&苍产蝉辫;容&苍产蝉辫;后&苍产蝉辫;涡&苍产蝉辫;旋&苍产蝉辫;超&苍产蝉辫;声&苍产蝉辫;提&苍产蝉辫;取，发&苍产蝉辫;现&苍产蝉辫;回收效果不稳定，回收率差异较大，且乳制品中的蛋白质往往黏结成&苍产蝉辫;块状。推&苍产蝉辫;测&苍产蝉辫;在&苍产蝉辫;乙&苍产蝉辫;腈&苍产蝉辫;快&苍产蝉辫;速&苍产蝉辫;加&苍产蝉辫;入&苍产蝉辫;后，蛋&苍产蝉辫;白质迅速黏结包夹了部分双氰胺。考察了缓慢加入乙腈对蛋白质沉淀和回收率的影响。结&苍产蝉辫;果&苍产蝉辫;表&苍产蝉辫;明，在&苍产蝉辫;涡旋条件下，缓慢加&苍产蝉辫;入&苍产蝉辫;乙&苍产蝉辫;腈&苍产蝉辫;能&苍产蝉辫;有&苍产蝉辫;效&苍产蝉辫;地&苍产蝉辫;防&苍产蝉辫;止&苍产蝉辫;蛋&苍产蝉辫;白&苍产蝉辫;质&苍产蝉辫;迅&苍产蝉辫;速黏结，蛋白质呈分散状态，回收率高且稳定。另外还考察了超声提取对回收率的影响，结果表明，在涡旋过程中缓慢加入乙腈后超声与否不影响提取效果。故本文采用在涡旋过程中缓慢加入乙腈的提取方式。
实验&苍产蝉辫;发&苍产蝉辫;现&苍产蝉辫;将&苍产蝉辫;上&苍产蝉辫;述&苍产蝉辫;提&苍产蝉辫;取&苍产蝉辫;液&苍产蝉辫;过&苍产蝉辫;微&苍产蝉辫;孔&苍产蝉辫;滤&苍产蝉辫;膜&苍产蝉辫;后&苍产蝉辫;直&苍产蝉辫;接&苍产蝉辫;进样，样品色&苍产蝉辫;谱&苍产蝉辫;图&苍产蝉辫;会&苍产蝉辫;有&苍产蝉辫;很&苍产蝉辫;高&苍产蝉辫;的&苍产蝉辫;溶&苍产蝉辫;剂&苍产蝉辫;峰。取１．０ｍＬ提取液于５０°C下&苍产蝉辫;氮&苍产蝉辫;气&苍产蝉辫;吹干，再&苍产蝉辫;用１．０ｍＬ流&苍产蝉辫;动&苍产蝉辫;相&苍产蝉辫;溶解，过滤膜，滤液供ＨＰＬＣ分&苍产蝉辫;析，则&苍产蝉辫;样&苍产蝉辫;品&苍产蝉辫;色&苍产蝉辫;谱&苍产蝉辫;图&苍产蝉辫;中&苍产蝉辫;的溶剂峰消失，因此，样品提&苍产蝉辫;取&苍产蝉辫;后&苍产蝉辫;取１．０ｍＬ提&苍产蝉辫;取&苍产蝉辫;液&苍产蝉辫;用氮气吹干，再用流动相重新溶解样品，供色谱检测。
２．３线性范围、检出限和定量限
对双氰胺的&苍产蝉辫;标&苍产蝉辫;准&苍产蝉辫;溶&苍产蝉辫;液&苍产蝉辫;进&苍产蝉辫;行&苍产蝉辫;检&苍产蝉辫;测，以&苍产蝉辫;仪&苍产蝉辫;器&苍产蝉辫;响&苍产蝉辫;应&苍产蝉辫;的峰面积Ｙ对双氰胺的质量浓度Ｘ进行线性回&苍产蝉辫;归，双氰胺在０．５～５０ｍｇ／Ｌ范&苍产蝉辫;围&苍产蝉辫;内&苍产蝉辫;的&苍产蝉辫;线&苍产蝉辫;性&苍产蝉辫;关&苍产蝉辫;系&苍产蝉辫;良&苍产蝉辫;好，回归方程&苍产蝉辫;为Ｙ＝１５３．８７Ｘ＋２１．５６，相&苍产蝉辫;关&苍产蝉辫;系&苍产蝉辫;数（ｒ２）为０．９９９９。在空白样品处理液&苍产蝉辫;中&苍产蝉辫;添&苍产蝉辫;加&苍产蝉辫;双&苍产蝉辫;氰&苍产蝉辫;胺&苍产蝉辫;标&苍产蝉辫;准&苍产蝉辫;品，以Ｓ／Ｎ＝３确定方法的检出限，以Ｓ／Ｎ＝１０确&苍产蝉辫;定&苍产蝉辫;方法的定量限，得到双氰胺的检出限为０．２ｍｇ／ｋｇ，定量限为０．５ｍｇ／ｋｇ。
２．４回收率和精密度
对乳粉（经确认不含双氰胺）样品进行回收率试验，添加水平分别为１．０、２．０和５．０ｍｇ／ｋｇ，采&苍产蝉辫;用&苍产蝉辫;优化后的前处理方&苍产蝉辫;法&苍产蝉辫;对&苍产蝉辫;样&苍产蝉辫;品&苍产蝉辫;进&苍产蝉辫;行&苍产蝉辫;处&苍产蝉辫;理，每&苍产蝉辫;个&苍产蝉辫;添&苍产蝉辫;加&苍产蝉辫;水&苍产蝉辫;平重复６次，平&苍产蝉辫;均&苍产蝉辫;回&苍产蝉辫;收&苍产蝉辫;率&苍产蝉辫;分&苍产蝉辫;别&苍产蝉辫;为１０１．０％、９６．７％和９９．７％，ＲＳＤ分别为４．８％、４．５％和４．９％（见表１）。
２．５实际样品测定
采用本方法对鲜奶、酸奶、炼乳、乳粉等４０批乳制品进行检测，结果均未检出双氰胺。
叁、结论
利用液相色谱法对乳制品中的双氰&苍产蝉辫;胺&苍产蝉辫;进&苍产蝉辫;行分&苍产蝉辫;析，该方法优化了ＸＢｒｉｄｇｅＡｍｉｄｅ柱的分析条件，色谱峰保留&苍产蝉辫;时&苍产蝉辫;间&苍产蝉辫;优&苍产蝉辫;化&苍产蝉辫;为５ｍｉｎ左&苍产蝉辫;右，大&苍产蝉辫;大&苍产蝉辫;降&苍产蝉辫;低&苍产蝉辫;了&苍产蝉辫;基质的干扰，方法简&苍产蝉辫;单&苍产蝉辫;快&苍产蝉辫;速，准&苍产蝉辫;确&苍产蝉辫;度&苍产蝉辫;和&苍产蝉辫;精&苍产蝉辫;密&苍产蝉辫;度&苍产蝉辫;高，适&苍产蝉辫;用于各种乳制品中双氰胺的检测。采用乙腈作为沉淀剂能有效地沉淀蛋白质，消除蛋白质干扰，从而保障了该方法对乳制品中双氰胺分析的准确性。本方法适用于乳制品中双氰胺的分析和质量控制。
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